植物细菌性病害是由植物病原细菌侵染引起的一类植物病害，其危害特征主要为斑点、溃疡、枯萎、腐烂、肿瘤等，严重影响农作物健康和农产品质量[1]。据统计，植物细菌性病害在全世界范围内每年造成的经济损失超过10 亿美元，如水稻白叶枯病菌（Xoo）、柑橘溃疡病菌（Xac）、水稻细条病菌（Xoc）等[2]。目前，用于防治这些病害的方法主要为化学防治、生物防治、农业防治、物理防治及种植抗病品种等[3-6]。其中，化学防治具有快速高效、作用范围广、使用方便等优点，是防治植物细菌性病害最直接有效的方法之一。但由于长期、高剂量、高频次地使用有限的几种杀菌剂品种，致使其面临着抗药性、环境污染、对非靶标生物有害等困境[7-8]。因此，研发具有高效、环境友好的新型杀菌剂替代传统杀菌剂，是当前新农药创制的重要方向之一。

天然产物作为传统杀菌剂的替代品，具有以下优势：（1）种类繁多。天然产物来源广泛，包括植物、微生物、海洋生物等，且具有一定的抗菌活性，如植物中的生物碱类、萜类、香豆素类、查耳酮类等[9-13]；（2）结构新颖。天然产物具有独特的化学结构，如来源于印楝树种子和叶片的印楝素具有复杂的环状结构和多个手性中心，与传统化学农药的结构差异显著，不易产生交叉抗性[14]；（3）储量丰富。许多天然产物可从可再生资源中大量获取，特别是从植物和微生物中获得，具有可持续开发的潜力[15]；（4）环境相容性好。天然产物通常不会在土壤和水体中长期残留。如苦参碱等植物提取物对非靶标生物的毒性较低，且不会在土壤中积累[16]；（5）易于降解。天然产物通常具有较好的生物降解性，降低了长期使用的生态风险，如枯草芽孢杆菌产生的抗菌肽能够自然降解，不会对环境造成污染[17]。基于天然产物的独特优势，常以天然产物作为前驱体进行结构修饰来创制新型环保农药。查耳酮作为α,β-不饱和羰基化合物，广泛存在于甘草、红花、明日叶等天然化合物中，其衍生物具有抗病毒[18]、杀菌[19-20]、杀虫[21]、除草[22]等农用生物活性。张伟等[23]发现，从补骨脂种子中提取的活性成分苯丙烯菌酮对水稻稻瘟病具有良好的防治效果，质量分数0.2%的苯丙烯菌酮微乳剂对水稻稻瘟病的防效达71%～85%。2,4,5-三甲氧基苯甲醛，又名细辛醛，主要来源于石菖蒲根茎、细辛等，具有抗菌[24]、治疗肥胖[25]等功效，常用于农药和医药的合成[26-29]。

哌嗪属于六元杂环，因其结构包含2 个可修饰的氮原子，提供了相对的结构刚性以及2 个氢键受体和供体，使其拥有良好的水溶性、靶标亲和力以及结构多样性，是小分子药物合成中最常用的三大含氮杂环之一，仅次于吡啶和哌啶[30-31]。其衍生物具有抗菌[32-34]、杀虫[35]、抗病毒[36]等生物活性，其中嗪胺灵是含哌嗪结构的广谱农用杀菌剂。因此，将2,4,5-三甲氧基苯甲醛、查耳酮和哌嗪进行活性拼接，并探究其抗菌活性，具有重要的研究意义，可为新农药的创制提供新的思路和科学参考。

本研究根据前期相关报道，以查耳酮为先导骨架，利用活性亚结构拼接原理，将2,4,5-三甲氧基苯基引入查耳酮骨架结构中，形成2,4,5-三甲氧基查耳酮结构，并将哌嗪单元引入天然活性单元查耳酮母体中，设计并合成了系列含酰基哌嗪结构的2,4,5-三甲氧基查耳酮衍生物（图1），并对其抑菌活性进行评估，以期得到具有高效抑菌活性的小分子农用杀菌剂候选化合物。

图1 目标化合物的设计思路
Fig.1 Design strategies of target compounds

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

对羟基苯乙酮、1-叔丁氧羰基哌嗪、苯磺酰氯、苯甲磺酰氯、3-氯苯磺酰氯、4-三氟甲基苯磺酰氯、噻吩-2-磺酰氯、吡啶-3-磺酰氯、4-溴苯磺酰氯、2,6-二氯苯磺酰氯、4-甲氧基苯磺酰氯、2-萘磺酰氯、乙基磺酰氯、4-氟苯磺酰氯、4-甲基苯磺酰氯、4-氯苯磺酰氯、3-溴苯甲酰氯、4-叔丁基苯甲酰氯、苯甲酰氯、4-甲氧基苯甲酰氯、2-溴苯甲酰氯、4-甲基苯甲酰氯、2-氟苯甲酰氯、4-三氟甲基苯甲酰氯、4-氟苯甲酰氯、2-甲氧基苯甲酰氯、2-氯苯甲酰氯、4-溴苯甲酰氯、3-氟苯甲酰氯、二氯甲烷、三乙胺（Et3N）、氢氧化钠、乙腈，AR，北京伊诺凯科技有限公司；2,4,5-三甲氧基苯甲醛、氯乙酰氯、无水碳酸钾、二甲基亚砜、戊二醛，AR，上海阿拉丁试剂有限公司；磷酸盐缓冲溶液（PBS）、SYTO9绿色荧光核酸染料（SYTO9）、碘化丙啶（PI）红色荧光核酸染料，美国Thermo Fisher Scientific 公司。

Xac、Xoo 和Xoc 为实验室长期保存的菌株。

AVANCE NEO 400 MHz 型核磁共振波谱仪，德国Bruker 公司；Xevo G2-S QTof 型四极杆飞行时间串联质谱仪，美国Waters 公司；Multiskan FC 型酶标仪，美国Thermo Fisher Scientific 公司；SGW®X-4B 型显微熔点测定仪，上海仪电物理光学仪器有限公司；Regulus 8100型扫描电子显微镜，日本HITACHI 公司；STELLARIS 5型激光共聚焦扫描显微镜，德国Leica 公司。

1.2 化合物合成

化合物H1～H14 和I1～I13 合成路线见图2。

图2 目标化合物H1～H14 和I1～I13 的合成路线
Fig.2 Synthesis routes of target compounds H1～H14 and I1～I13

中间体A1 和B1 的合成以4-苯磺酰基哌嗪-1-羧酸叔丁酯为例。将2.50 g（13.42 mmol）1-叔丁氧羰基哌嗪、1.69 g（16.70 mmol）三乙胺和30 mL 二氯甲烷（CH2Cl2）加入到100 mL 圆底烧瓶中，在冰浴下逐滴加入4.74 g 苯磺酰氯（26.84 mmol），反应30 min 后撤去冰浴，在室温下反应10～15 h，使用薄层层析色谱〔V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=3∶1〕跟踪反应。反应结束后，将反应物倒入100 mL 饱和食盐水中，用二氯甲烷萃取3 次，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，减压脱除溶剂，得到淡黄色固体，再用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体4-苯磺酰基哌嗪-1-羧酸叔丁酯。A1 和B1 的其他中间体换成相应原料按此法合成。

中间体A2 和B2 的合成以4-苯磺酰基哌嗪盐酸盐的合成为例。将2.00 g（6.13 mmol）4-苯磺酰基哌嗪-1-羧酸叔丁酯、20 mL 甲醇加入到100 mL 三口烧瓶中，在室温下搅拌，用质量分数5%的盐酸水溶液调节体系pH 至1，使用薄层层析色谱〔V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=3∶1〕跟踪反应。反应结束后，减压脱除溶剂，得到4-苯磺酰基哌嗪盐酸盐，不需纯化直接投入下一步反应。A2 和B2 的其他中间体换成相应原料按此法合成。

中间体A3 和B3 的合成以2-氯-1-[4-(苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙-1-酮的合成为例。在100 mL 三口烧瓶中，分别加入2.00 g（8.80 mmol）4-苯磺酰基哌嗪盐酸盐和15 mL 二氯甲烷，常温搅拌使固体溶解，然后逐滴加入1.19 g（10.56 mmol）氯乙酰氯，在常温下继续搅拌8 h。反应结束后，将反应物倒入100 mL 饱和食盐水中，采用二氯甲烷萃取3 次，合并有机相、无水硫酸镁干燥，过滤、减压脱除溶剂，得到粗产物，粗产物经柱层析〔V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=1∶2〕进行纯化，得到2-氯-1-[4-(苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙-1-酮。A3 和B3 的其他中间体换成相应原料按此法合成。

中间体C 的合成：将1.36 g（10.00 mmol）对羟基苯乙酮，2.35 g（12.00 mmol）2,4,5-三甲氧基苯甲醛和20 mL 无水乙醇（EtOH）加入到50 mL圆底烧瓶中，在冰浴下缓慢滴加14 mL 质量分数5%的氢氧化钠水溶液，室温下反应10 h，使用薄层层析色谱〔V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=3∶1〕跟踪反应。反应结束后，将反应物倒入装有100 mL 冰水的烧杯中，用质量分数5%的盐酸调节pH 至5～6，有大量淡黄色固体析出，过滤得到中间体C。

目标化合物H1～H14 和I1～I13 的合成：在圆底烧瓶中加入3.14 g（10.00 mmol）中间体C、A3 或B3（10.50 mmol）、1.38 g（10.00 mmol）无水碳酸钾和30 mL 乙腈，加热至回流，使用薄层层析色谱〔V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=3∶1〕跟踪反应。反应结束后，将反应物倒入100 mL 饱和食盐水中，采用二氯甲烷萃取3 次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压脱除溶剂，得到粗产物，粗产物经柱层析〔V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=3∶1〕进行纯化，得到目标化合物H1～H14 和I1～I13。

1.3 抑菌活性测试

参考文献[37]，采用浊度法对化合物进行抑菌活性测试，平行实验3 次，结果以“算术平均值±标准偏差”表示，结果讨论时均使用算术平均值。抑制率通过光密度（OD）按式（1）～（2）进行计算：

1.4 SEM 测试

参考文献[37]，对待测样品进行前处理。将1.5 mL处于对数生长期的 Xoo 菌液离心后，用 PBS（pH=7.0）重悬至1.5 mL。将质量浓度为50、100 μg/mL 的H5 化合物分别与Xoo 菌液混合，同时取等体积二甲基亚砜作为空白对照，室温孵育8～10 h。孵育后样品经PBS 洗涤3 次，用质量分数2.5%的戊二醛于4 ℃下固定8 h，随后依次采用无水乙醇进行脱水处理。脱水后的样品经冷冻干燥25 min 后喷金，通过SEM 观察分析Xoo 微观形态的变化，评估H5 对Xoo 细胞膜的影响。

1.5 活/死染色测试

参考文献[38]方法，对Xoo 进行活/死染色测定，以评估H5 的抗菌活性。将1 mL 培养至对数生长期的Xoo 菌液在2000 r/min 下离心2 min 后收集菌体。用1 mL 的PBS（pH=7.2）洗涤细菌3 次后，重悬于1 mL 的PBS 中。随后，将菌液分别与未加药剂的样品及质量浓度为100 μg/mL 的H5（溶剂为二甲基亚砜）在28 ℃下孵育6 h。孵育结束后，取160 μL菌液与20 μL SYTO 9（质量浓度20 μg/mL）和20 μL PI（质量浓度10 μg/mL）混合，于28 ℃避光条件下孵育30 min 后，再次离心收集菌体，用PBS 洗涤3 次，然后重悬于1 mL PBS 中。最终取5 μL 处理后的菌悬液置于荧光显微镜下进行成像观察。通过Image J 软件对荧光成像中的活/死细胞进行定量分析，按式（3）计算：

2 结果与讨论

2.1 目标化合物的结构表征

1-(4-[2-氧代-2-(4-苯磺酰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H1）：黄色固体，收率为83%，熔点171～173 ℃。1HNMR(400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.95 (d, J = 8.9 Hz, 2H, 苯环-H), 7.72～7.65 (m,2H, 苯环-H), 7.59 (d, J = 7.4 Hz, 1H, 查耳酮-H),7.51 (t, J = 7.5 Hz, 2H, 苯环-H), 7.44 (d, J = 15.7 Hz,1H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 6.93 (d, J =8.9 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.72 (s,2H, —CO—CH2—), 4.01～3.88〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.74～3.66 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.03～2.93 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.13, 166.01,160.70, 154.68, 152.51, 143.29, 139.80, 134.98,133.38, 132.71, 130.76, 129.27, 127.58, 119.84,115.49, 114.20, 111.59, 96.87, 67.61, 56.62, 56.38,56.11, 46.20, 45.82, 44.90, 41.57。HRMS (ESI)，m/Z：C30H32N2O8S[M+H]+ 理论值 581.1952 ， 实测值581.1951。

1-(4-[2-氧代-2-(4-苄基磺酰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H2）：黄色固体，收率为34%，熔点131～133 ℃。1HNMR(400 MHz, CDCl3)，δ：8.06 (m, J = 20.7、12.2 Hz, 3H,查耳酮-H, 苯环-H), 7.48 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 苯环-H),7.40～7.29 (m, 5H, 苯环-H, 查耳酮-H), 7.12 (s, 1H,苯环-H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s,1H, 苯环-H), 4.73 (s, 2H, —CO—CH2—), 4.21 (s,2H, —CH2—), 4.00～3.88〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.54 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.11～3.00 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.25, 166.06,160.82, 154.68, 152.50, 143.28, 139.88, 132.83,130.83, 130.57, 129.07, 128.95, 128.32, 119.88,115.50, 114.30, 111.60, 96.87, 67.65, 60.41, 56.60,56.38, 56.10, 46.20, 45.76, 42.29。HRMS (ESI)，m/Z：C31H34N2O8S[M+H]+ 理论值 595.2109 ， 实测值595.2102。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(3-氯苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H3）：黄色固体，收率为50%，熔点163～165 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.09 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.68 (d, J = 1.6 Hz, 1H, 苯环-H), 7.55 (t, J = 8.2 Hz,2H,苯环-H, 查耳酮-H), 7.49～7.41 (m, 2H, 苯环-H),7.13 (s, 1H, 苯环-H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 2H, 苯环-H),6.54 (s, 1H, 苯环-H), 4.73 (s, 2H, —CO—CH2—),4.02～3.85〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.71 (m, 4H, 哌嗪-H),2.98 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.05, 166.09, 160.66, 154.69, 152.52, 143.29,139.83 136.77, 135.56, 133.52, 132.74, 130.77, 130.62,127.58, 125.60, 119.77, 115.50, 114.18, 111.57, 96.87,67.68, 56.61, 56.38, 56.11, 46.19, 45.84, 44.91, 41.57。HRMS (ESI)，m/Z：C30H31ClN2O8S[M+H]+理论值615.1562，实测值615.1556。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H4）：黄色固体，收率为43%，熔点169～171 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.84 (m, J = 20.4、8.5 Hz, 4H, 苯环-H, 查耳酮-H),7.43 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H),6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.72 (s, 2H —CO—CH2—), 3.93 〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.72 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.13～3.03 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.23, 166.02, 160.71,154.67, 152.50, 143.28, 139.87, 139.29, 132.89, 130.77,128.13, 126.51, 119.87, 115.51, 114.25, 111.55, 96.87,67.51, 56.59, 56.37, 56.10, 46.10, 45.67, 44.89, 41.49；19FNMR (377 MHz, CDCl3)，δ：-63.13。HRMS (ESI)，m/Z：C31H31F3N2O8S[M+H]+理论值649.1826，实测值649.1820。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(噻吩-2-基磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H5）：黄色固体，收率为82%，熔点165～167 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H, 苯环-H),7.61 (d, J = 5.0 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.45 (d, J =16.0 Hz, 2H, 噻吩-H), 7.16～7.08 (m, 2H, (苯环-H,噻吩-H), 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s,1H, 苯环-H), 4.75 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.98～3.89〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.74 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.10～2.93 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.18, 166.06, 160.70, 154.69, 152.53, 143.29,139.86, 134.99, 132.88, 130.81, 127.86, 119.83,115.45, 114.23, 111.60, 96.86, 67.69, 56.62, 56.38,56.11, 46.25, 45.87, 44.79, 41.48。HRMS (ESI)，m/Z：C28H30N2O8S2[M+H]+理论值 587.1516，实测值587.1517。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(吡啶-3-基磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H6）：黄色固体，收率为76%，熔点133～135 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H,吡啶-H), 8.81 (d, J = 4.7、1.2 Hz, 1H, 吡啶-H), 8.09(d, J = 15.7 Hz, 1H,查耳酮-H), 7.95 (d, J = 8.7 Hz,3H, 苯环-H, 吡啶-H), 7.45 (d, J = 15.5 Hz, 2H, 吡啶-H, 查耳酮-H), 7.14 (s, 1H, 苯环-H), 6.93 (d, J =8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.73 (s,2H, —CO—CH2—), 4.02～3.88 〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.77～3.69 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.08～2.96 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.09, 166.09,160.62, 154.69, 153.94, 152.53, 148.34, 143.29,139.84, 135.14, 132.77, 131.96, 130.78, 123.92,119.78, 115.47, 114.18, 111.56, 96.86, 67.67, 56.60,56.38, 56.10, 46.06, 45.71, 44.89, 41.52。HRMS(ESI)，m/Z：C29H31N3O8S[M+H]+理论值582.1905，实测值582.1902。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-溴苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H7）：黄色固体，收率为44%，熔点162～164 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.67 (d, J = 8.5 Hz, 2H, 苯环-H), 7.57 (d, J = 8.6 Hz,2H, 苯环-H), 7.44 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H),7.12 (s, 1H, 苯环-H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.72 (s, 2H, —CO—CH2—),3.93 〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.70 (m, 4H, 哌嗪-H),3.02 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.23, 166.01, 160.73, 154.66, 152.49, 143.28,139.85, 134.39, 132.84, 132.64, 130.78, 129.07,128.53, 119.90, 115.52, 114.26, 111.54, 96.87, 67.54,56.61, 56.39, 56.10, 46.12, 45.71, 44.86, 41.48。HRMS (ESI)，m/Z：C30H31BrN2O8S[M+Na]+理论值681.0877，实测值681.0873。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(2,6-二氯苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H8）：黄色固体，收率为27%，熔点94～96 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.45 (m, J = 11.8、3.9 Hz, 3H, 查耳酮-H, 苯环-H),7.33 (d, J = 8.6、7.4 Hz, 1H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.00 (d, J = 8.9 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H,苯环-H), 4.78 (s, 2H, —CO—CH2—), 4.00～3.89 〔m,9H, (—OCH3)3〕, 3.70 (s, 4H, 哌嗪-H), 3.39 (m, 4H,哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.23,166.15, 160.79, 154.67, 152.48, 143.28, 139.80,135.63, 132.92, 132.79, 131.84, 130.83, 119.91,115.51, 114.28, 111.57, 96.87, 67.71, 56.60, 56.38,56.10, 45.94, 45.52, 42.09。HRMS (ESI)，m/Z：C30H30Cl2N2O8S[M+Na]+理论值 671.0992，实测值671.0981。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H9）：黄色固体，收率为27%，熔点188～190 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.97 (d, J = 8.7 Hz, 2H, 苯环-H),7.63 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 7.44 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 6.96 (d, J =12.1、8.8 Hz, 4H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.72 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93 〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.85 (s, 3H, —OCH3), 3.69 (m, 4H, 哌嗪-H),3.08～2.92 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz,CDCl3)，δ：189.18, 165.98, 163.39, 160.76, 154.65,152.49, 143.29, 139.76, 132.74, 130.75, 129.80,126.53, 119.86, 115.52, 114.42, 114.26, 111.52, 96.87,67.53, 56.61, 56.38, 56.10, 55.69, 46.21, 45.79, 44.87,41.52。HRMS (ESI)，m/Z：C31H34N2O9S[M+Na]+理论值633.1877，实测值633.1867。

1-(4-{2-[4-(萘-2-基磺酰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H10）：黄色固体，收率为42%，熔点105～107 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.29 (d, J = 1.2 Hz, 1H,萘-H), 8.06 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.95 (d, J =8.9 Hz, 2H, 苯环-H), 7.89 (d, J = 8.9 Hz, 3H, 萘-H),7.68～7.60 (m, 3H, 萘-H), 7.37 (d, J = 15.7 Hz, 1H,查耳酮-H), 7.10 (s, 1H, 苯环-H), 6.89 (d, J = 8.9 Hz,2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.68 (s,2H, —CO—CH2—), 4.01～3.88 〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.70 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.07 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.16, 165.98,160.69, 154.65, 152.48, 143.28, 139.72, 134.99,132.71, 132.22, 132.11, 130.71, 129.56, 129.20,128.10, 127.84, 122.50, 119.90, 115.52, 114.18,111.50, 96.87, 67.53, 56.61, 56.38, 56.10, 46.30, 45.89,44.94, 41.59。HRMS (ESI)，m/Z：C34H34N2O8S[M+Na]+理论值653.1928，实测值653.1916。

1-(4-[2-氧代-2-(4-乙基磺酰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H11）：黄色固体，收率为76%，熔点132～134 ℃。1HNMR(400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 8.02 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 7.46 (d, J =15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.03(d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.80 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.98～3.89 〔m, 9H,(—OCH3)3〕, 3.75～3.67 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.29 (m, 4H,哌嗪-H), 2.93 (q, J = 7.4 Hz, 2H, —CH2—), 1.34 (t, J =7.4 Hz, 3H, —CH3)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.28, 166.16, 160.85, 154.67, 152.50, 143.28,139.83, 132.84, 130.84, 119.88, 115.48, 114.32, 111.56,96.86, 67.69, 56.60, 56.38, 56.10, 45.97, 45.57, 44.46,42.20, 7.76。HRMS (ESI)，m/Z：C26H32N2O8S[M+Na]+理论值555.1772，实测值555.1772。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-氟苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H12）：黄色固体，收率为73%，熔点171～173 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.72 (d, J = 8.8、5.0 Hz, 2H, 苯环-H), 7.44 (d, J =15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.21 (t, J = 8.5 Hz, 2H, 苯环-H),7.12 (s, 1H, 苯环-H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 2H, 苯环-H),6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.72 (s, 2H, —CO—CH2—),3.99～3.88 〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.70 (m, 4H, 哌嗪-H),3.04～2.96 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz,CDCl3)，δ：189.19, 166.71, 165.95, 164.17, 160.72,154.67, 152.50, 143.28, 139.85, 132.79, 130.75,130.39, 130.29, 119.82, 116.75, 116.53, 115.50, 114.24,111.55, 96.87, 67.54, 56.60, 56.38, 56.10, 46.13, 45.74,44.84, 41.49。19FNMR (377 MHz, CDCl3)，δ：-103.68。HRMS (ESI)，m/Z：C30H31FN2O8S[M+Na]+理论值621.1677，实测值621.1667。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-甲基苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H13）：黄色固体，收率为94%，熔点158～160 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.58 (d, J = 8.2 Hz, 2H, 苯环-H), 7.44 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 2H, 苯环-H), 7.12(s, 1H, 苯环-H), 6.94 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53(s, 1H, 苯环-H), 4.71 (s, 2H, —CO—CH2—),4.01～3.88 〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.69 (m, 4H, 哌嗪-H),3.06～2.90 (m, 4H, 哌嗪-H), 2.42 (s, 3H, —CH3)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.19, 165.97,160.75, 154.66, 152.50, 144.34, 143.28, 139.82,132.73, 132.06, 130.74, 129.89, 127.66, 119.87,115.49, 114.25, 111.56, 96.87, 67.53, 56.61, 56.38,56.10, 46.21, 45.77, 44.89, 41.53, 21.55。HRMS(ESI)，m/Z：C31H34N2O8S[M+Na]+理论值617.1928，实测值617.1920。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-氯苯磺酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（H14）：黄色固体，收率为79%，熔点162～164 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.65 (d, J = 8.6 Hz, 2H, 苯环-H), 7.47 (m, J = 26.5、12.1 Hz, 3H, 苯环-H, 查耳酮-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H),6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.72 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93 〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.70 (m, 4H, 哌嗪-H), 3.02 (m, 4H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.23, 166.02,160.72, 154.66, 152.49, 143.28, 140.02, 139.86,133.84, 132.84, 130.77, 129.65, 129.01, 119.89,115.52, 114.25, 111.55, 96.87, 67.56, 56.61, 56.38,56.10, 46.12, 45.72, 44.87, 41.50。HRMS (ESI)，m/Z：C30H31ClN2O8S[M+H]+理论值 615.1562，实测值615.1560。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(3-溴苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I1）：黄色固体，收率为29%，熔点111～113 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 8.03 (d, J = 8.7 Hz, 2H, 苯环-H),7.57 (d, J = 8.5、6.2 Hz, 2H, 苯环-H), 7.46 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.31 (d, J = 6.3 Hz, 2H, 苯环-H),7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H, 苯环-H),6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.81 (s, 2H, —CO—CH2—),3.93 〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.55 (s, 8H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.29, 168.92,166.28, 160.84, 154.66, 152.47, 143.28, 139.82,136.91, 133.27, 132.86, 130.86, 130.32, 130.16,125.58, 122.87, 119.93, 115.53, 114.30, 111.57, 96.87,67.74, 56.60, 56.39, 56.10, 45.48, 42.28。HRMS(ESI)，m/Z：C31H31BrN2O7[M+H]+理论值623.1387，实测值623.1390。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-叔丁基苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I2）：黄色固体，收率为41%，熔点109～111 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 8.02 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.45 (d, J = 14.3、12.1 Hz, 3H, 苯环-H, 查耳酮-H),7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H),7.03 (d, J = 8.5 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.81 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.92 〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.66 (s, 8H, 哌嗪-H), 1.32〔s, 9H, —C(CH3)3〕。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.29, 170.86,166.23, 160.91, 154.65, 153.59, 152.45, 143.27,139.77, 132.79, 131.96, 130.84, 127.02, 125.59,119.94, 115.53, 114.31, 111.54, 96.87, 67.68, 56.59,56.38, 56.09, 45.55, 42.28, 34.87, 31.18。HRMS(ESI)，m/Z：C35H40N2O7[M+H]+理论值601.2908，实测值601.2903。

1-(4-[2-氧代-2-(4-苯甲酰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I3）：黄色固体，收率为42%，熔点169～171 ℃。1HNMR(400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 8.02 (d, J = 8.7 Hz, 2H, 苯环-H), 7.53～7.35(m, 6H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H),7.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.81 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.66 (s, 8H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.30, 170.67, 166.26, 160.88, 154.65, 152.45,143.27, 139.79, 134.98, 132.82, 130.85, 130.21,128.70, 127.09, 119.95, 115.54, 114.31, 111.56, 96.87,67.72, 56.59, 56.38, 56.10, 45.44, 42.38。HRMS(ESI)，m/Z：C31H32N2O7[M+H]+理论值545.2282，实测值545.2279。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I4）：黄色固体，收率为21%，熔点154～156 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 8.02 (d, J = 8.9 Hz, 2H, 苯环-H),7.46 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.41～7.34 (m,2H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.03 (d, J =8.8 Hz, 2H, 苯环-H), 6.95～6.89 (m, 2H, 苯环-H), 6.53(s, 1H, 苯环-H), 4.81 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93 〔m,9H, (—OCH3)3〕, 3.83 (s, 3H, —OCH3), 3.62 (s, 8H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：170.66, 166.24,161.16, 160.91, 154.65, 152.45, 143.27, 139.77, 132.79,130.84, 129.26, 126.93, 119.95, 115.54, 114.32, 113.91,111.55, 96.87, 67.70, 56.59, 56.38, 56.09, 55.40, 45.51,42.32。HRMS (ESI)，m/Z：C32H34N2O8[M+H]+理论值575.2388，实测值575.2389。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(2-溴苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I5）：黄色固体，收率为24%，熔点109～110 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.9 Hz,1H, 查耳酮-H), 8.02 (t, J = 9.2 Hz, 2H, 苯环-H),7.59 (d, J = 7.9 Hz, 1H, 苯环-H), 7.47 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.38 (t, J = 7.2 Hz, 1H, 苯环-H),7.28 (d, J = 8.9 Hz, 1H, 苯环-H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz,1H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.02 (d, J = 21.5、8.5 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.80 (s, 2H,—CO—CH2—), 3.93 〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.65 (m, 6H,哌嗪-H), 3.24 (m, 2H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz,CDCl3)，δ：189.32, 167.98, 166.26, 160.90, 154.66,152.45, 143.28, 139.82, 132.98, 130.85, 130.74, 127.96,127.69, 119.93, 119.06, 115.54, 114.33, 111.57, 96.87,67.63, 56.59, 56.39, 56.10, 45.16, 42.27。HRMS (ESI)，m/Z：C31H31BrN2O7[M+H]+理论值623.1387，实测值623.1382。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-甲基苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I6）：黄色固体，收率为80%，熔点163～165 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.05 (m, J = 21.7、12.2 Hz, 3H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.46 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.30 (d, J = 7.9 Hz, 2H, 苯环-H),7.22 (d, J = 7.8 Hz, 2H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H),7.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.81 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.65 (s, 8H, 哌嗪-H), 2.38 (s, 3H, —CH3)。13CNMR(101 MHz, CDCl3)，δ：189.30, 170.88, 166.25, 160.90,154.65, 152.45, 143.27, 140.49, 139.78, 132.80,131.97, 130.84, 129.27, 127.23, 119.95, 115.54,114.31, 111.55, 96.87, 67.69, 56.59, 56.38, 56.09, 45.46,42.28, 21.41。HRMS (ESI)，m/Z：C32H34N2O7[M+H]+理论值559.2439，实测值559.2442。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(2-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I7）：黄色固体，收率为42%，熔点177～179 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.07 (d, J = 16.1 Hz, 1H,查耳酮-H), 8.02 (s, 2H, 苯环-H), 7.46 (d, J = 17.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 7.41 (d, J = 6.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.25～7.18 (m, 1H, 苯环-H), 7.12 (s, 2H, 苯环-H),7.07～6.94 (m, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.81 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93 〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.84～3.49 (m, 6H, 哌嗪-H), 3.32 (s, 2H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.31, 166.25, 165.53,165.29, 160.90, 154.65, 152.44, 143.27, 139.79,132.83, 131.90, 130.85, 124.99, 119.98, 115.55,114.32, 111.56, 96.88, 67.62, 56.59, 56.38, 56.09,45.24, 42.23。19FNMR (377 MHz, CDCl3)，δ：-114.89。HRMS (ESI)，m/Z：C31H31FN2O7 [M+H]+理论值563.2188，实测值563.2186。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I8）：黄色固体，收率为26%，熔点147～149 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.05 (m, J = 22.0、12.2 Hz, 3H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.70 (d, J = 8.1 Hz,2H, 苯环-H), 7.49 (d, J = 22.9、11.8 Hz, 3H, 查耳酮-H,苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.09～6.96 (m, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.82 (s, 2H, —CO—CH2—),4.18～3.84 〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.60 (m, 8H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.27, 169.13,166.30, 160.81, 154.67, 152.49, 143.28, 139.84,132.88, 130.86, 127.49, 125.83, 119.88, 115.50,114.28, 111.57, 96.86, 67.75, 56.60, 56.37, 56.09,45.34, 42.35。19FNMR (377 MHz, CDCl3)，δ：-62.95。HRMS (ESI)，m/Z：C32H31F3N2O7[M+H]+理论值613.2156，实测值613.2157。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I9）：黄色固体，收率为29%，熔点125～127 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.08 (d, J = 15.7 Hz,1H, 查耳酮-H), 8.02 (d, J = 8.8 Hz, 2H, 苯环-H),7.46 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H), 7.44～7.37 (m,2H, 苯环-H), 7.16～7.11 (m, 2H, 苯环-H), 7.09 (s,1H, 苯环-H), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53(s, 1H, 苯环-H), 4.81 (s, 2H, —CO—CH2—),4.02～3.86〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.66 (s, 8H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.27, 169.75, 166.27,164.89, 162.40, 160.87, 154.66, 152.48, 143.26, 139.79,132.81, 130.84, 129.50, 119.87, 115.83, 115.49, 114.30,111.54, 96.86, 67.68, 56.59, 56.37, 56.09, 45.39, 42.27。HRMS (ESI)，m/Z：C31H31FN2O7[M+H]+理论值563.2188，实测值563.2193。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(2-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I10）：黄色固体，收率为23%，熔点112～114 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ： 8.19～7.88 (m, 3H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.47 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H),7.37 (t, J = 7.8 Hz, 1H, 苯环-H), 7.24 (d, J = 7.2 Hz,1H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.09～6.96 (m,3H, 苯环-H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H, 苯环-H), 6.53(s, 1H, 苯环-H), 4.80 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.92〔m,9H, (—OCH3)3〕, 3.82 (s, 3H, —OCH3), 3.62 (m, 6H,哌嗪-H), 3.25 (m, 2H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz,CDCl3)，δ：189.33, 168.13, 167.90, 166.25, 166.10,160.97, 155.21, 154.65, 152.44, 143.27, 139.76,132.78, 130.83, 128.16, 121.17, 114.35, 111.55,110.95, 96.88, 67.58, 56.59, 56.38, 56.10, 55.56, 45.31,42.48。HRMS(ESI)，m/Z：C32H34N2O8[M+H]+理论值575.2388，实测值575.2391。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(2-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I11）：黄色固体，收率为23%，熔点113～115 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.16～7.97 (m, 3H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.57～7.28 (m, 5H, 查耳酮-H, 苯环-H),7.12 (s, 1H, 苯环-H), 7.02 (d, J = 21.4、8.4 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H), 4.80 (s, 2H, —CO—CH2—),3.93〔m, 9H, (—OCH3)3〕, 3.86～3.49 (m, 6H, 哌嗪-H),3.43～3.05 (m, 2H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz,CDCl3)，δ：189.30, 167.18, 166.25, 160.91, 154.65,152.45, 143.27, 139.79, 132.82, 130.84, 130.64,129.81, 127.78, 127.45, 119.95, 115.53, 114.33,111.55, 96.87, 67.58, 56.59, 56.38, 56.10, 45.10,42.30。HRMS (ESI)，m/Z：C31H31ClN2O7[M+H]+理论值579.1893，实测值579.1891。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(4-溴苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I12）：黄色固体，收率为24%，熔点163～165 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.05 (m, J = 22.0、12.2 Hz, 3H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.56 (d, J = 8.3 Hz,2H, 苯环-H), 7.46 (d, J = 15.7 Hz, 1H, 查耳酮-H),7.28 (d, J = 5.7 Hz, 2H, 苯环-H), 7.12 (s, 1H, 苯环-H),7.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.81 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.65 (s, 8H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.28, 169.63, 166.28, 160.84, 154.66, 152.48,143.28, 139.82, 133.74, 132.85, 131.96, 130.86,128.84, 124.63, 119.90, 115.51, 114.30, 111.56, 96.87,67.72, 56.60, 56.38, 56.10, 45.49, 42.23。HRMS(ESI)，m/Z：C31H31BrN2O7[M+Na]+理论值645.1201，实测值645.1199。

1-(4-{2-氧代-2-[4-(3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]乙氧基}苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮（I13）：黄色固体，收率为28%，熔点169～171 ℃。1HNMR (400 MHz, CDCl3)，δ：8.18～7.97 (m, 3H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.43 (m, J = 22.9、10.7 Hz, 2H, 查耳酮-H, 苯环-H), 7.19～7.08 (m, 4H, 苯环-H), 7.03(d, J = 8.2 Hz, 2H, 苯环-H), 6.53 (s, 1H, 苯环-H),4.81 (s, 2H, —CO—CH2—), 3.93〔m, 9H, (—OCH3)3〕,3.55 (d, 8H, 哌嗪-H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3)，δ：189.28, 169.14, 166.27, 163.82, 161.35, 160.84,154.66, 152.47, 143.27, 139.81, 132.85, 130.85,130.57, 122.72, 119.92, 117.38, 117.17, 115.52,114.43, 111.56, 96.87, 67.72, 56.59, 56.38, 56.09,45.56, 42.28。19FNMR (377 MHz, CDCl3)，δ：-111.15。HRMS (ESI)，m/Z：C31H31FN2O7[M+Na]+理论值585.2001，实测值585.2009。

2.2 抑菌活性测试结果

不同质量浓度的目标化合物H1～H14 和I1～I13对Xoc、Xoo、Xac 的抑菌活性结果见表1。

表1 不同质量浓度的目标化合物H1～H14 和I1～I13 对Xoc、Xoo、Xac 的抑菌活性
Table 1 In vitro antibacterial activity of target compounds H1～H14 and I1～I13 against Xoc, Xoo, Xac

注：“—”代表无此取代基。

images/BZ_169_366_456_2115_710.pngXoc 抑制率/% Xoo 抑制率/% Xac 抑制率/%化合物 R1 R2 100 μg/mL50 μg/mL100 μg/mL50 μg/mL 100 μg/mL 50 μg/mL H1 苯基 — 32.26±4.34 16.66±4.90 63.55±4.4442.32±3.61 34.15±1.68 27.94±3.08 H2 苄基 — 35.92±1.56 21.17±1.74 42.47±3.2711.88±2.65 35.77±1.76 24.36±1.77 H3 3-氯苯基 — 34.46±1.841.01±3.61 63.46±1.0341.65±2.21 33.83±2.93 13.82±2.46 H4 4-三氟甲基苯基 — 37.81±4.516.90±4.31 62.46±1.1849.08±1.35 31.77±1.88 19.67±4.75 H5 2-噻吩基 — 14.15±1.830.92±4.04 75.65±4.0961.04±1.04 25.98±4.38 16.80±1.69 H6 3-吡啶基 — 47.46±3.19 26.12±4.11 57.10±3.2548.57±2.47 34.84±1.16 28.85±0.97 H7 4-溴苯基 — 40.24±3.05 26.12±3.01 65.80±1.7655.51±2.15 28.74±2.98 19.66±3.01 H8 2,6-二氯苯基 — 43.60±1.47 11.98±3.06 32.29±4.2517.55±3.63 27.94±4.67 15.74±4.36 H9 4-甲氧基苯基 — 37.94±3.952.36±3.10 57.04±3.6838.55±2.79 31.71±4.90 23.92±4.28 H10 2-萘基 — 32.67±4.264.55±4.86 64.97±0.8356.01±3.22 25.51±4.16 19.33±3.36 H11 乙基 — 42.65±2.00 22.30±4.60 67.04±4.9952.76±1.69 30.10±2.63 24.41±2.19 H12 4-氟苯基 — 47.59±0.51 40.40±3.16 62.37±3.5048.33±3.62 26.30±3.87 12.75±3.32 H13 4-甲基苯基 — 50.24±4.68 34.58±4.42 60.55±2.9841.88±3.94 32.58±1.95 25.67±1.78 H14 4-氯苯基 — 44.20±4.13 13.34±3.15 20.39±3.471.68±1.89 29.22±3.35 19.78±1.45 I1 — 3-溴苯基 28.36±4.070 54.77±3.0811.61±3.68 41.81±2.72 32.89±2.68 I2 — 4-叔丁基苯基 54.90±4.39 27.01±1.63 62.88±0.7755.02±1.86 29.49±3.86 18.75±0.56 I3 — 苯基 47.16±3.67 24.07±1.45 49.25±3.1927.58±3.37 27.45±4.92 21.29±1.17 I4 — 4-甲氧基苯基 33.50±4.45 16.92±1.02 42.88±4.8828.94±3.98 27.23±3.30 17.72±3.35 I5 — 2-溴苯基 26.26±4.520 40.22±1.448.02±3.29 52.40±2.20 39.92±2.80 I6 — 4-甲基苯基 44.12±3.87 34.39±3.15 37.37±2.8319.24±3.71 41.31±3.80 14.90±4.11 I7 — 2-氟苯基 51.68±3.13 44.17±1.90 64.71±2.3435.88±4.10 41.33±2.14 32.63±4.21 I8 — 4-三氟甲基苯基 33.81±1.85 28.49±2.20 37.37±2.8310.29±0.72 39.71±2.51 26.47±2.98 I9 — 4-氟苯基 16.72±2.110 60.86±3.0440.38±1.25 45.71±3.12 30.56±4.95 I10 — 2-甲氧基苯基 17.54±1.761.82±4.47 48.93±3.6628.44±3.24 50.50±3.84 41.00±2.71 I11 — 2-氯苯基 26.88±3.984.08±3.78 59.20±4.7539.37±1.90 46.68±2.61 32.68±1.44 I12 — 4-溴苯基 29.99±1.39 23.30±2.72 54.85±1.0635.04±3.44 40.62±4.72 32.95±2.05 I13 — 3-氟苯基 66.52±1.09 59.69±1.56 49.68±4.1942.13±2.38 41.12±3.12 31.32±4.91叶枯唑 — — 59.80±0.74 47.42±1.48 63.13±1.1848.82±2.31 50.78±1.25 22.42±2.16噻菌铜 — — 45.17±2.63 20.64±4.35 58.19±3.5540.54±2.16 43.71±3.50 32.45±4.96

由表1 可知，H 和I 系列目标化合物对Xoc、Xoo、Xac 都具有一定的抑制活性。当目标化合物质量浓度为100 μg/mL 时，I13 对Xoc 的抑制率为66.52%，活性比2 个对照药叶枯唑和噻菌铜更好；H1、H3、H5、H7、H10、H11、I7 对Xoo 的抑制率为63.46%～75.65%，均优于对照药剂叶枯唑（63.13%）和噻菌铜（58.19%）；I5 对Xac 的抑制率为52.40%，优于对照药剂叶枯唑（50.78%）和噻菌铜（43.71%）。初步构效关系分析发现：针对Xoo，当目标化合物的质量浓度为100 μg/mL，且R1 或R2 都是相同基团时，抑制率大小分别为：H1＞ I3、H4＞I8、H7＞I12、H9＞I4、H12＞I9、H13＞I6，说明H 系列化合物相较于I 系列化合物具有更高的活性，其主要原因在于，H 系列化合物中所含的磺酰基团是决定其抗Xoo 活性的关键结构。在H 系列化合物中，当R1 为苯基时，对Xoo 的抑制率为 20.39%～65.80%，抑制率最高的为 H7（65.80%）；当R1 为苄基和烷基时，H11＞H2；当R1为噻吩环和吡啶环时，H5＞H6，特别是H5，抑菌活性最优，达到75.65%，优于H 和I 系列其他目标化合物和对照药叶枯唑和噻菌铜抑菌的活性。

表2 为部分目标化合物对Xoo、Xoc 的EC50 测试结果。

表2 部分目标化合物对Xoo、Xoc 的EC50 测试
Table 2 EC50 test of several target compounds against Xoo and Xoc

注：回归方程中y 为抑制率的几率值；x 为药剂质量浓度的对数值。

化合物 菌种 EC50/(μg/mL) 毒力回归方程 R2 EC50 的95%置信区间H5 Xoo 22.50±0.49 y=0.8946x+3.7903 0.9768 22.50±1.22 H7 Xoo 29.55±1.74 y=0.8884x+3.6936 0.9892 29.55±4.32 H10 Xoo 45.08±2.91 y=1.3516x+2.7645 0.9560 45.08±7.22 H11 Xoo 41.23±4.09 y=0.9959x+3.3914 0.9922 41.23±10.15 I13 Xoc 25.39±2.45 y=0.8925x+3.7464 0.9927 25.39±6.08 I2 Xoo 28.98±3.03 y=0.5936x+4.1321 0.9999 28.98±7.52 Xoo 47.78±4.62 y=1.0160x+3.2939 0.9710 47.78±11.47叶枯唑Xoc 47.64±2.98 y=1.3118x+2.7988 0.9984 47.64±7.40 Xoo 100.33±4.61 y=1.1331x+2.7322 0.9623 100.33±11.45噻菌铜Xoc 109.30±3.53 y=1.6083x+1.7213 0.9932 109.30±8.76

由表2 可知，化合物H5、H7、H10、H11 和I2对Xoo 的EC50 值分别为22.50、29.55、45.08、41.23和 28.98 μg/mL，均优于对照药剂叶枯唑（47.78 μg/mL）和噻菌铜（100.33 μg/mL）；化合物I13 对Xoc 的EC50 值为25.39 μg/mL，优于对照药剂叶枯唑（47.64 μg/mL）和噻菌铜（109.30 μg/mL）。

2.3 目标化合物H5 对Xoo 细胞膜的影响

为探究不同质量浓度的H5 对Xoo 细胞膜的影响，采用 SEM 对其微观形貌进行观察，结果见图3。

图3 不同质量浓度H5 对Xoo 细胞膜作用后的SEM 图
Fig.3 SEM images of Xoo cell membranes after the treatment of different mass concentrations of H5

A—0；B—50 μg/mL；C—100 μg/mL

由图3 可见，空白对照组（图3A）的细胞形态呈长椭圆形，细胞表面规整，粗细均匀，形态饱满。经H5 刺激后，Xoo 细胞的形态出现明显的变化；当处理质量浓度为50 μg/mL 时，大部分细胞都出现严重的皱缩、扭曲和凹陷（图3B）；而当质量浓度增至100 μg/mL 时，Xoo 细胞已基本失去原本的结构形貌，大部分细胞都出现膨大、严重皱缩、破洞、裂解等现象（图3C）。表明设计合成的目标化合物对植物病原细菌具有明显的破坏作用，这可能是其发挥抗菌活性的关键原因之一。

2.4 评估H5 对Xoo 细胞活力的影响

为进一步评估H5 对Xoo 细胞活力的影响，采用SYTO9/PI 染色法对其进行活/死细胞检测，结果见图4。

图4 SYTO9/PI 双荧光染色观察H5 质量浓度为100 μg/mL 时对Xoo 的杀菌活性
Fig.4 Bactericidal activity of H5 at a mass concentration of 100 μg/mL against Xoo observed using SYTO9/PI dual fluorescence staining

依据细胞膜完整性来区分活细胞和死细胞[39]。在染色过程中，SYTO9 对所有待测菌进行染色标记并发出绿色荧光，而PI 仅能穿透受损的细胞膜，对坏死细胞进行染色，发出红色荧光。由图4可知，未进行处理的细胞（对照组）的显微荧光图像呈绿色，表明 Xoo 保持存活状态；而经过质量浓度为100 μg/mL 的H5 处理后，荧光图像呈红色，表明经H5 处理导致Xoo 细胞部分坏死或晚期凋亡。

表3 为H5 对Xoo 荧光成像中的活/死细胞分析。由表3 可知，对照组中的活细胞占比为97.96%，死细胞占比为2.04%；经过质量浓度为100 μg/mL 的H5 处理后，活细胞占比降至25.67%，死细胞占比增至74.33%。进一步证实H5 对Xoo 细胞活力具有显著的抑制作用。

表3 H5 对Xoo 荧光成像中的活/死细胞分析
Table 3 Analysis of live/dead cells in Xoo using H5 via fluorescence imaging

药剂质量浓度/(μg/mL) 活细胞占比/% 死细胞占比/%0 97.96±3.54 2.04±3.54 100 25.67±0.47 74.33±0.47

3 结论

本文以2,4,5-三甲氧基苯甲醛作为起始原料，经羟醛缩合与取代反应，设计合成了27 个含酰基哌嗪结构的2,4,5-三甲氧基查耳酮衍生物，并通过NMR和HRMS 对其结构进行表征确证。生物活性测试结果表明，设计的部分化合物对测试的植物病原细菌表现出较为优异的抑制活性。其中，化合物H5、H7、H10、H11、I2 对Xoo 的EC50 值分别为22.50、29.55、45.08、41.23、28.98 μg/mL，I13 对Xoc 的EC50 值为25.39 μg/mL，活性都优于阳性药物噻菌铜和叶枯唑。此外，SEM 结果表明，H5 对Xoo 的细胞形态及细胞膜具有明显的破坏作用；SYTO9/PI染色法进一步验证了H5 对Xoo 细胞活力的显著抑制作用。本文初步证实了含酰基哌嗪结构的2,4,5-三甲氧基查耳酮衍生物具有一定的研究意义，可为未来开发新型农用杀菌剂提供先导化合物。特别是H5，值得进一步深入研究，包括对其作用机制及作为杀菌剂先导化合物的毒理学与环境影响进行探讨和评估。

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Design, synthesis and antibacterial activity of 2,4,5-trimethoxychalcone derivatives containing acylpiperazine structure

FANG Chengjiang, LEI Huanhuan, ZHANG Tao, ZHANG Renfeng, ZHENG Yuguo*
（Key Laboratory of Chemical Synthesis and Environmental Pollution Control-Remediation Technology of Guizhou Province, Minzu Normal University of Xingyi, Xingyi 562400, Guizhou, China）

Abstract: To thoroughly explore the application potential of natural product 2,4,5-trimethoxybenzaldehyde in the field of agricultural fungicides, 27 chalcone derivatives containing acylpiperazine structures were designed and synthesized from 2,4,5-trimethoxybenzaldehyde, a major component of Acorus tatarinowii,and characterized by NMR and HRMS.The target compounds were evaluated via turbidity method for their in vitro antibacterial activity against plant pathogenic bacteria, including Xanthomonas oryzae pv.Oryzae (Xoo), Xanthomonas oryzae pv.Oryzicola (Xoc), and Xanthomonas axonopodis pv.Citri (Xac).The results demonstrated that most target compounds exhibited significant inhibitory activity against Xoo. Notably,1-(4-{2-oxo-2-[4-(thiophen-2-ylsulfonyl)piperazin-1-yl]ethoxy}phenyl)-3-(2,4,5-trimethoxyphenyl)prop-2-en-1-one (H5) displayed the most prominent antibacterial efficacy, with a median effective concentration(EC50) value of 22.50 μg/mL significantly superior to those of reference agents bismerthiazol (47.78 μg/mL)and thiediazole copper (100.33 μg/mL), respectively.SEM and SYTO9/PI fluorescent staining further proved that the target compound H5 exhibited significant bactericidal activity against Xoo.

Key words: 2,4,5-trimethoxybenzaldehyde; chalcone; piperazine; synthesis; antibacterial activity; pesticide materials

中图分类号：O626；TQ455.4

文献标识码：A

文章编号：1003-5214 (2026) 04-0850-13

收稿日期：2025-03-08; 定用日期：2025-04-28;

DOI: 10.13550/j.jxhg.20250150

基金项目：贵州省普通高等学校青年科技人才成长项目（黔教合KY 字[2022]102 号）

作者简介：方成江（1990—），男，讲师，E-mail：fangcj202001@163.com。联系人：郑玉国 （1982—），男，教授，E-mail：yuguobaolong@163.com。